Auftauen und Aussaat

Auftauen
und Aussaat

Das Einfrieren und Auftauen kann für eine Zellkultur eine ziemliche Herausforderung darstellen. Um eine hohe Lebensfähigkeit der kryokonservierten Zellen zu gewährleisten, ist es wichtig, den Auftauprozess zügig durchzuführen und die Zellen mit großer Vorsicht zu behandeln. Wir freuen uns, Ihnen eine Reihe von Spezialgeräten zur Verfügung stellen zu können, die Sie bei der heiklen Handhabung von kryokonservierten Zelllinien unterstützen können.

Auftauen und Aussäen gefrorener Zellen

Zum Auftauen der Zelllinie, entnehmen Sie das Vial aus dem Behälter mit dem flüssigen Stickstoff und achten Sie darauf, dass Sie angemessene Schutzkleidung tragen (Laborkittel,Kryo-Handschuhe und Schutzbrillen). Seien Sie vorsichtig, denn in seltenen Fällen kann das Vial aufgrund der schnellen Ausdehnung des eingeschlossenen Flüssigstickstoffs explodieren.
Tauchen Sie das Vial sofort in ein 37˚C warmes Wasserbad Sobald nur noch wenige Eiskristalle vorhanden sind, desinfizieren Sie das Kryoröhrchen mit 70 %igem Ethanol und bringen Sie es in eine Sicherheitswerkbank (oder Laminar-Flow-Haube).
Um den osmotischen Stress, der auf Ihre Zellen einwirkt, zu minimieren, geben Sie eine kleine Menge (ca. 1 mL) des vorgewärmten (37°C) und geeigneten Zellkulturmediums tropfenweise hinzu (Pipettierhelfer, serologische Pipetten). Überführen Sie die Lösung mit Ihren Zellen (erneut tropfenweise) in das restliche Volumen des Zellmediums.
Zentrifugieren Sie die Zellen 3 Minuten lang bei 300 g und saugen Sie dann vorsichtig den Überstand ab, um etwaige Reste von Kryokonservierungsmitteln zu entfernen, wobei Sie darauf achten, dass das Zellpellet nicht gestört wird. Schließlich resuspendieren Sie die Zellen in vorgewärmtem Kulturmedium und überführen sie in das gewünschte Kulturgefäß.
Beschriften Sie das Gefäß (Zelllinie, Datum und Passage). Stellen Sie das Kulturgefäß in den Inkubator. Wenn Sie mit adhärenten Zellen arbeiten, prüfen Sie nach 24 Stunden, ob die Zellen anhaften.