Zellmedium Wechsel

Wechsel des
Zellkulturmediums

Zelllinien sind auf das Zellkulturmedium und seine Zusätze angewiesen, um wichtige Nährstoffe wie Kohlenhydrate, Vitamine, Aminosäuren, Mineralien, Wachstumsfaktoren und Hormone zu erhalten. Das Medium sorgt auch für die Aufrechterhaltung der physikalisch-chemischen Eigenschaften, wie pH-Wert und osmotischer Druck, die für ein optimales Zellwachstum entscheidend sind. Die sorgfältige Auswahl eines geeigneten Mediums ist von größter Bedeutung, da sie das Ergebnis des Zellwachstums erheblich beeinflussen kann.

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Wechsel des Zellkulturmediums

Auswahl des Zellkulturmediums

Die Auswahl des idealen Zellkulturmediums für Ihre Zelllinie kann eine Herausforderung darstellen, da es eine große Auswahl an Optionen gibt. Zellkulturmedien können je nach der Menge des zugesetzten Serums in verschiedene Kategorien eingeteilt werden: serumhaltige Medien, serumreduzierte Medien und serumfreie Medien. Fötales Rinderserum, auch bekannt als FBS, wird üblicherweise verwendet, um angereicherte Medien zu ergänzen und wichtige Wachstumsfaktoren, Hormone, Nährstoffe und Spurenelemente bereitzustellen. Viele Labore sind jedoch heutzutage bestrebt, die Verwendung von FBS zu minimieren, da seine undefinierten Bestandteile die Reproduzierbarkeit beeinträchtigen können und wegen seinen hohen Kosten und dem Potenzial für unerwünschte stimulierende oder hemmende Effekte. Um das für Ihre Zellen am besten geeignete Medium zu bestimmen, konsultieren Sie die für Ihre Zelllinie bereitgestellten Spezifikationen.

Diese Ressource zielt darauf ab, eine Vielzahl von häufig verwendeten Zellkulturmedien (wie DMEM, DMEM/F12, MEM, RPMI 1640 und Medium 199) sowie Ergänzungen wie Aminosäuren, Serum und Serumersatzstoffe, Antibiotika und ausgewogene Salze anzubieten.

Zellkulturmedium Wechsel

Für das Wohlbefinden und die Entwicklung der Zellen ist es wichtig, das Medium regelmäßig zu wechseln. In der Regel wird das Medium alle 2-3 Tage gewechselt, wobei der spezifische Zeitrahmen je nach Zelltyp, der kultiviert wird, unterschiedlich sein kann. Den meisten Zellkulturmedien wird Phenolrot zugesetzt, ein Indikatorfarbstoff, der das Medium gelb färbt, wenn der pH-Wert sauer ist. Dies dient als Indikator dafür, wann ein Mediumwechsel erforderlich ist.

  1. Legen Sie das gewählte Medium ca. 15 Minuten vor dem Medienwechsel in das Wasserbad (37°C). Sobald sich das Medium erwärmt hat, trocknen Sie die Flasche mit einem Tuch ab, besprühen sie mit 70%igem Ethanol und stellen die Flasche unter die Laminar-Flow-Haube.

  2. Nehmen Sie die (adhärente) Zellen aus dem Inkubator und achten Sie darauf, die Belüftungskappe nicht zu berühren. Desinfizieren Sie das Kulturgefäß, bevor Sie es unter die Sicherheitswerkbank stellen. Neigen Sie die Zellkulturflasche mit den Zellen leicht und verwenden Sie eine Vakuumpumpe oder eine serologische Pipette, um das alte Medium zu entsorgen, wobei Sie darauf achten müssen, die Zellschicht nicht zu berühren. Entnehmen Sie mit einer sterilen serologischen Pipette die gewünschte Menge an neuem Medium (in der Regel 10 mL für eine T75-Zellkulturflasche) und geben Sie es vorsichtig an einen Rand der Zellkulturflasche, ohne die anhaftenden Zellen zu stören.

  3. Ziehen Sie den Deckel der Zellkulturflasche fest an und stellen Sie sie in den Inkubator. Bewahren Sie das Medium im Kühlschrank bei der angegebenen Temperatur auf.

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